熒光分光光度計采用150W濱松高品質氙燈和高性能光電倍增管,具有高檢測靈敏度、高測試速度、人性化的多功能控制和分析的操作軟件,高速掃描時1秒內即可完成全譜掃描、計算和測量,其專業(yè)軟件包含多種分析功能,豐富的附件大大擴展儀器的應用范圍,可支持液態(tài)、粉末、薄膜樣品的測量,既可對產生熒光互淬滅的高濃度樣品實現測量,也可對少至5μl的微量樣品實現測量,并可配備自動進樣系統(tǒng)等等。
熒光強度容易受外界因素的影響,如樣品池、激發(fā)光源、溫度、溶液的pH值、溶劑性質、其它溶質、表面活性劑等都會造成熒光強度的變化。嚴格控制測試條件對熒光分析來說至關重要。
?、贅悠窇⒃谒拿嫱腹獾氖⒈壬螅晒獬兀┲?,如果是揮發(fā)性樣品應使用帶塞的熒光池。
?、谠跓晒夥治鰰r,為了得到穩(wěn)定可靠的數據,一般需要開機預熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈,預熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質,盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。
③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度,有利于提高熒光量子產率,熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異,大部分熒光物質的熒光強度受溫度影響不大,測試溫度變化不超過±3℃,對測試結果幾乎無影響。
?、墚敓晒馕镔|是弱酸或弱堿時,溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中,分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變,而熒光物質的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。以苯胺為例:在pH=7~12的溶液中會產生藍色熒光,在pH<2或ph>13的溶液中都不產生熒光。再如,維生素B2(核黃素)在430~440nm藍光照射下會發(fā)出綠色熒光,λem為535nm。它在pH=6~7的溶液中熒光強度最大,而在pH=11時熒光消失;但在堿性溶液經光線照射發(fā)生分解作用或在酸性KMn04氧化下都會生成熒光強度比維生素B2強得多的黃光素,并可溶于氯仿。利用此性質可提高測定的靈敏度和選擇性。
?、莘肿咏Y構中存在π-π共軛的熒光物質在極性溶劑中,熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。
?、奕鹄⑸浜屠⑸涫侨軇┑膬煞N散射光,應注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同,拉曼散射與激發(fā)光波長不同,而熒光物質的熒光波長與激發(fā)光波長無關,因此可以通過選擇適當的激發(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度,或者空白扣除,也可以對散射光的影響進行校正。
?、邿晒馕镔|分子與溶液中其它物質分子之間作用導致熒光強度降低,常見的熒光猝滅劑,如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質、重氮化合物等。溶液中的溶解氧也能引起幾乎所有的熒光物質產生不同程度的熒光熄滅現象,因此,在較嚴格的熒光實驗中必須除02。
?、鄿y試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看,以防對眼睛造成損傷。
?、醿x器房應注意經常通風,避免產生的臭氧在室內富集。